miR3p靶向NRP2抑制宫颈

本文发表于：

《中国计划生育学杂志》年第11期

余琴1陈昌谊1龚瑶2*

1.重医院()；2.重庆医院

宫颈癌在妇科恶性肿瘤中发病率位居第二，而死亡率居首位［1］。手术、化学疗法和放射疗法是目前常用治疗方法。微小RNA（miRNA）是短调控RNA，通过与目标基因转录本的互补位点结合翻译抑制控制基因表达［2］。研究发现，miR--3p在多种肿瘤发生中起抑制作用，在肝癌细胞株（HepG2、SMMC-、Bel-等）中表达下调，miR--3p通过下调E2F1促进肝癌细胞增殖和迁移，且随着肝癌细胞株侵袭转移程度增加表达下调［3］。本研究通过探讨miR--3p靶向神经纤毛蛋白-2（NRP2）对宫颈癌细胞增殖、迁移以及侵袭的影响，为临床靶向治疗宫颈癌提供理论基础。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1主要实验试剂人正常宫颈上皮细胞HcerEpic、人宫颈癌HeLa细胞系（美国ATCC细胞库），10％胎牛血清（美国ClarkBioscience公司），胰蛋白酶（含EDTA）（美国Gibco公司），miR--3p、NRP2质粒和各引物序列（广州市锐博生物科技有限公司），50U/ml青霉素-链霉素、RIPA裂解液、Trizol试剂和BCA试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司），Lipofectamine（美国Invitrogen公司），兔来源单克隆一抗NRP2、PCNA、MMP-2、MMP-9、GAPDH和山羊抗兔单克隆二抗（美国Abcam公司），逆转录试剂盒及SYBRGreenPCRMasterMix试剂盒（TaKaRa公司），Transwell小室、F12培养基（美国BD公司），ECL发光液、双荧光素酶报告基因检测试剂盒（美国Promega公司）。

1.1.2主要仪器实时荧光定量PCR仪、ECL发光仪（Bio-Rad公司），低温高速离心机（Thermo公司），倒置光学显微镜和成像系统（Nikon），酶标仪（Servicebio），ABI序列检测系统上的PremixExTaqTM（TaKaRa公司）。

1.2建立细胞模型及分组

人宫颈癌HeLa细胞加入含有50U/ml青霉素-链霉素和10%胎牛血清的RPMI-培养基中，并在37℃5%CO2培养箱中孵育。根据转染不同将HeLa细胞分为对照组、mimicNC组、miR--3pmimic组、siRNANC组、si-NRP2组、miR--3pmimic+NRP2组。将μl质粒终浓度为nmol/L的Lipofectamine混合液转染至各组，其中mimic组和miR--3pmimic组分别转染mimicNC和miR--3pmimic质粒；siRNANC组和si-NRP2组分别转染siRNANC和si-NRP2；miR--3pmimic+NRP2组转染miR--3pmimic和NRP2过表达质粒；对照组不转染。

1.3观察指标

1.3.1miR--3p靶基因利用TargetScan数据库（