Merlin和Stathmin在胰腺癌中

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黄月容1，康举龄2，魏涛1，刘倩平1，潘华英1

1.南方医院（医院）

2.医院

摘要

目的探讨Merlin、Stathmin在胰腺癌中的表达及其与各临床病理因素的关系。方法采用免疫组化两步法检测40例胰腺癌及20例正常胰腺中Merlin、Stathmin的表达。结果Merlin在胰腺癌中的阳性率为95%（38/40），在正常胰腺中的阳性率为45%（9/20），Merlin在胰腺癌中表达高于正常胰腺（卡方=16.，P＜0.）；Stathmin在胰腺癌中的阳性率为80%（32/40），在正常胰腺中的阳性率为35%（7/20）。结论Merlin、Stathmin在胰腺癌的侵袭、转移过程中可能起促进作用，它们有望成为胰腺癌的新的肿瘤标志物或新的肿瘤治疗靶点，为胰腺癌的诊断及治疗提供线索。

关键词：Merlin；Stathmin；胰腺癌；淋巴结转移；侵袭

胰腺癌（pancreaticcarcinoma）是起源于胰腺上皮细胞的一种恶性程度很高、诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤[1-2]。胰腺癌治疗以手术、放疗、化疗、免疫治疗及靶向药物治疗等综合治疗为主[3]。胰腺癌早期缺乏特征性临床表现，极易发生浸润及转移，根治性手术切除率低[4]。鉴于以上原因，目前亟需寻找早期发现、早期诊断胰腺癌的线索及新的治疗药物靶点。而目前国内有关Merlin、Stathmin在胰腺癌方面的研究甚少，因此，本实验研究观察Merlin、Stathmin在胰腺癌中的表达情况，探讨其临床意义，以期为胰腺癌的早期发现、早期诊断，判断预后及新的治疗药物靶点提供线索。

1资料与方法

1.1标本来源及临床资料

收集本院、医院、医院年4月至年8月住院患者手术切除胰腺癌石蜡标本共40例。40例胰腺癌临床资料均齐全。年龄37～78岁，中位年龄60.5岁；男22例，女18例；所有糖尿病患者均在胰腺癌诊断前已确诊，病程2个月～10年。另外选取20例非胰腺癌手术切除正常胰腺组织作为对照组。

1.2抗体试剂

一抗兔抗人Merlin多克隆抗体（BA/0.1mL；μg/mL）、兔抗人Stathmin多克隆抗体（BA/0.1mL；μg/mL）均购自武汉博士德生物工程有限公司。二抗即用型EnVisionTM试剂盒（K过氧化物酶/DAB/兔抗）购自Dako公司。

1.3免疫组织化学法

所有标本蜡块排序后均重新切成4μm厚切片并烤片，二甲苯脱蜡，梯度酒精水合，灭活内源性过氧化氢酶；然后用PBS缓冲液浸泡清洗。抗原修复（高压锅热修复）冷却后放入PBS缓冲液中浸泡清洗。滴加一抗（按照预实验抗体浓度滴定稀释抗体，兔抗人Merlin多克隆抗体按照1∶的浓度稀释，兔抗人Stathmin多克隆抗体按照1∶50的浓度稀释滴加一抗）后，放入湿盒中37℃孵育2h。蒸馏水冲洗干净一抗，再置于PBS缓冲液中浸泡清洗，滴加二抗并放到湿盒中37℃孵育30min。DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，干燥，封片。

1.4结果判定

Merlin、Stathmin分子定位在细胞的细胞质和细胞膜上，两个抗体阳性表达均为细胞膜或细胞质中出现黄色或棕黄色染色。根据免疫组织化学结果分级法，对Merlin、Stathmin免疫组织化学染色阳性细胞进行判定。

1.5观察指标

①Merlin在胰腺癌及正常胰腺中的表达；②Merlin的表达与胰腺癌各临床病理因素的相关性；③Stathmin在胰腺癌及正常胰腺中的表达。

1.6统计学方法

应用SPSS13.0统计软件对所得出的实验数据进行统计学分析。对胰腺癌及正常胰腺免疫组织化学阳性染色情况分析应用四格表卡方检验进行统计分析，以P＜0.05为差异有统计学意义；对胰腺癌阳性情况与各临床病理学因素等相关性分析应用Spearman等级相关进行统计分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1Merlin在胰腺癌及正常胰腺中的表达

40例胰腺癌中Merlin阳性表达38例（38/40，95%）；20例正常胰腺中Merlin阳性表达9例（9/20，45%），比较差异有统计学意义（卡方=16.，P＜0.），见表1。Merlin在胰腺癌及正常胰腺的表达，见图1。

2.2Merlin的表达与胰腺癌各临床病理因素的相关性

40例胰腺癌各临床病理因素与Merlin表达情况，见表2。TNM分期与Merlin阳性表达情况Spearman等级相关系数r=0.，差异有统计学意义（P＜0.）；淋巴结转移与NF2/Merlin阳性表达情况Spearman等级相关系数r=0.，差异有统计学意义（P＜0.）。提示Merlin与胰腺癌的淋巴结转移、TNM分期均有明显相关性，并呈正相关。

2.3Stathmin在胰腺癌及正常胰腺中的表达

40例胰腺癌中Stathmin阳性32例（32/40，80%）；20例正常胰腺中Stathmin阳性7例（7/20，35%），比较差异有统计学意义（卡方=11.，P=0.），见表3。Stathmin在胰腺癌及正常胰腺的表达，见图2。

3结论

胰腺癌因易发生淋巴结转移、血管、神经浸润等被称为“癌中之王”[1-2]，目前其具体机制尚未清楚。推测其恶性侵袭行为可能与某些基因或蛋白的激活、突变等有关。

Merlin在胰腺癌中高表达与淋巴结转移及TNM分期相关，推测可能机制为其编码基因NF2抑癌基因发生突变或缺失而失去抑制肿瘤生长[5-6]。失活的Merlin蛋白FREM区处于“休眠”状态，肿瘤细胞骨架发生变形，运动能力增强，发生浸润和转移。

本研究结果显示，胰腺癌中Merlin蛋白及Stathmin蛋白均高表达，并且与胰腺癌的淋巴结转移与TNM分期均有相关性，同时此二者在胰腺癌中的表达存在相关性，结合这两个蛋白在促进肿瘤迁徙、转移的作用，推测这可能是胰腺癌较其他肿瘤进展快、更早出现转移，预后更差的原因。

综上所述，本研究检测了Merlin、Stathmin在胰腺癌中的表达情况，并分析了其与各临床病理因素间的相关性，表明这两个蛋白在胰腺癌的侵袭转移过程中发挥了非常重要的促进作用。但是Merlin、Stathmin在胰腺癌侵袭转移过程中的具体机制有待进一步明确[7-10]。能否真正能成为新的肿瘤标志物或肿瘤治疗靶点，有待进一步大量的临床试验验证。

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