在胰腺癌中干扰P300能够增强吉西他滨引

密歇根州立大学的HiroakiOno等人年在《Oncotarget》（IF=5.；医学分类下的1区期刊）发表了题为“Pinhibitionenhancesgemcitabine-inducedapoptosisofpancreaticcancer”的文章。文章主要内容为：

转录辅因子P具有组蛋白乙酰化转移酶的活性（HAT）并参与了染色质重塑和DNA修复的过程。我们设想靶定P能够增强吉西他滨的化疗作用，并通过DNA损伤引起胰腺癌细胞凋亡。蛋白免疫印迹和免疫组化实验表明，P在胰腺癌细胞系和人胰腺癌组织中表达较高。当用吉西他滨处理胰腺癌细胞系24小时后，P被招募到染色质上来应答DNA损伤。在胰腺癌细胞中通过RNA干扰使P基因沉默，组蛋白乙酰化程度将随之发生降低并增加了吉西他滨的药物敏感性。在胰腺癌细胞系中使用选择性P抑制剂C处理后，同样可发生组蛋白乙酰化程度降低，并增强吉西他滨引起的细胞凋亡及治疗作用。我们的研究暗示着P能增加胰腺癌对吉西他滨化疗的抵抗作用并暗示P组蛋白乙酰化转移酶活性可能作为病人治疗的一个靶点，改善胰腺癌病人的状况。

胰腺癌是死亡率非常高的癌症。吉西他滨是目前胰腺癌患者化疗的重要药物，但是耐药性限制了吉西他滨的治疗作用。

P是一个kDa的转录辅助因子，具有组蛋白乙酰化转移酶的活性。P结合到染色质的组蛋白上并使组蛋白乙酰化，导致各种基因的转录激活。因此，P参与了细胞的各种功能包括增殖，分化和凋亡。特别的是P在DNA受到紫外照射和辐射损伤后的修复中发挥着重要的作用。在正常的细胞中，P被认为肿瘤的抑制基因，但是P在各种类型的肿瘤中都存在着过量的表达，P的过表达对于癌症病人的预后十分不利。

我们假设，在胰腺癌中，P与会参与化学药物引起的DNA损伤、起到化疗抵抗作用，靶定P能够增加化学药物的治疗作用。

1.蛋白免疫印迹

2.免疫荧光

3.细胞核蛋白细胞质蛋白分离

4.小干扰RNA干扰

5.细胞活力检测

6.克隆形成实验

7．凋亡分析

8.统计学分析

1.在胰腺癌细胞中P异常表达

图1.（A）在人的胰腺癌细胞系中使用免疫印迹检测内源性P的表达。（B）免疫组化和HE染色检测P的表达。（C）免疫荧光检测PSN1和MIAPaCa2细胞系中P的表达情况。在细胞系中，P主要定位于细胞核中。

2.使用吉西他滨处理后，增加了P与染色质的结合

图2.（A）免疫印迹检测MIAPaCa2和Pancl1细胞的细胞核中P游离型及于染色质结合型的分布情况，结果显示大部分处于游离状态。（B）吉西他滨处理胰腺癌细胞系24小时后，P与染色质的结合增加。（C）使用吉西他滨处理，随着时间的增加，P在组蛋白上的结合依次增加，呈时间依赖性。

3.在胰腺癌细胞中，干扰P增加了吉西他滨引起的细胞凋亡

图3：（A）当RAN干扰P24小时后，加入吉西他滨处理96小时，通过WST-8检测细胞活力，当干扰后，两种细胞的活力与对照组相比，都显著性的降低。（B）加入不同浓度的吉西他滨，随着药物浓度的增加，细胞的活力有所降低，干扰P使吉西他滨药物的活性增强并具有剂量依赖性。（C）干扰P后，吉西他滨引起的DNA损伤和细胞凋亡检测。

图4：流式细胞术和TUNEL染色分析吉西他滨引起细胞凋亡。（A）MIPaCa细胞使用15nM的吉西他滨处理72小时后，使用annexinV-FITC和PI对细胞进行染色。当干扰P后，细胞的凋亡有明显的增加。(B)MIAPaCa2细胞用20nM的吉西他滨处理96小时后，干扰对照组与干扰P组相比，干扰PTUNAL阳性的细胞数目明显增加。MIAPaCa2细胞使用20nM的吉西他滨处理24小时后，换没有药物的培养基培养9天，干扰组与干扰对照组相比，克隆数目有明显的降低。

图5：(A)RNA干扰P，组蛋白H3K9和H3K27的乙酰化程度都有所下降。（B）C同样能够抑制组蛋白的乙酰化。（C）在MAPaCa2细胞和Panc1细胞中，加入C同样能增强吉西他滨对细胞的作用。（D）加入C后，能够增加活化的Caspase3和PARP。