Biomaterials外泌体介导的PA

胰腺癌的存活率很低，目前仍是最具侵袭性和破坏性的恶性肿瘤之一，主要原因是缺乏有效的生物标志物用于诊断，且晚期疾病的治疗选择有限。外泌体(Exo)作为细胞源性囊泡，广泛用于天然的纳米药物载体。P21活化激酶4(PAK4)在过表达时具有致瘤作用，会促进细胞存活、迁移和锚定非依赖性生长。在此，英国伦敦国王学院KhuloudT.Al-Jamal在肿瘤内给药后，使用Exo介导的RNAi在体内胰腺癌肿瘤小鼠模型中验证了PAK4可作为治疗靶点。

本文首先用蔗糖缓冲液超速离心分离胰腺癌源性Exo，并对其表面标志物的表达、大小、数量、纯度和形态进行了表征。通过电穿孔将siRNA包埋在Exo中，用流式细胞仪和共聚焦显微镜观察Exo和siRNA的双重摄取。采用流式细胞仪、蛋白印迹和体外划痕试验对摄取后的体外siPAK4沉默进行评估。在含胰腺癌的NSG小鼠模型上评价了siPAK4的体内疗效（肿瘤生长延迟和小鼠存活率）。用HE染色和免疫组织化学方法检测体外肿瘤。结果表明，获得了高质量的胰腺癌衍生PANC-1Exo。siRNA被整合到Exo中，负载效率为16.5%。体外成像证实了Exo和siRNA在细胞中共定位。

体外培养24?h后，30?nMexo-siPAK4成功敲除PAK4。瘤内注射Exo-siPAK4（0.03?mg/kgsiPAK4和6.1?×?10^11Exo）可降低体内胰腺癌肿瘤生长并提高小鼠存活率（p??0.），与用作商业转染剂的聚乙烯亚胺（PEI）相比，毒性更小。肿瘤组织HE染色显示siPAK4治疗组有明显的组织凋亡。综上所述，PAK4基因敲除可延长胰腺癌荷瘤小鼠的存活时间，表明其有作为胰腺癌治疗新靶点的潜力。PANC-1Exo作为体内RNAi转染试剂，与PEI相比，具有同样的效果，且更安全。

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